它是用壓泵將具有不同性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑，緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后依次進(jìn)入檢測器，色譜信號由記錄儀、積分儀或色譜工作站記錄。

    色譜柱是液相色譜的心臟，在液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。

    色譜柱使用一段時(shí)間后就會出現(xiàn)柱壓升、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時(shí)間改變等變化，如不采取措施，將會縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。因此，有必要加和規(guī)范色譜柱的管理，從而延長色譜柱的使用壽命。

    影響色譜柱使用壽命的因素

    1 流動(dòng)相

    在以水溶液為流動(dòng)相時(shí)，水溶液中的微生物例如細(xì)菌容易生長，當(dāng)用水溶液或有機(jī)酸緩沖液保護(hù)柱子時(shí)，一些霉菌可能在色譜柱中滋生，堵塞固定相顆粒間的空隙。由于濕法填充技術(shù)的問世，目前普遍使用的色譜柱填料直徑一般都小于10um，流動(dòng)相中的顆粒雜質(zhì)容易沉積在柱頭然后慢慢堵塞柱子。流動(dòng)相的pH值對色譜柱也有影響，是對化學(xué)鍵合硅膠填料，水溶液的pH***適范圍在2~7.5之間，當(dāng)pH>8時(shí)，硅膠會釋出生成絮狀物堵塞柱子，且難以復(fù)原，柱效快降低，甚至*失效。

    當(dāng)在緩沖液中加入有機(jī)溶劑例如甲醇或乙腈時(shí)，鹽類的溶解度下降，會析出鹽沉淀，堵塞柱子。同時(shí)流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑和鹽會腐蝕色譜柱頭的篩板，產(chǎn)生柱頭凹陷。流動(dòng)相的性對柱子也有一定影響，對于硅膠柱，甲醇、水、冰乙酸等性較大物質(zhì)會破壞填料；反之，對于化學(xué)鍵合硅膠，性小的物質(zhì)如正丁醇、二氯甲烷等也起同樣的作用。堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱，而酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱。

    2 樣品和固定相

    如果有少量或微量的樣品不能夠溶解在流動(dòng)相中，在通過固定相會堵塞柱子，樣品中的顆粒雜質(zhì)也會堵塞柱子。樣品組分例如糖、蛋白質(zhì)等通過柱子時(shí)會產(chǎn)生不可逆吸附，這樣固定相的活性點(diǎn)被覆蓋。樣品組分還會與固定相產(chǎn)生反應(yīng)，尤其是對于氨基柱的影響較為嚴(yán)重。因?yàn)榘被着c酐、酮形成希夫(Schiff)縮合而減少活性點(diǎn)，使保留時(shí)間縮短。色譜柱鍵合相基團(tuán)脫落、固定相分解和活性基團(tuán)變性以及會影響柱效和保留時(shí)間的顯著改變。大多數(shù)鍵合相都是通過硅氧硅鍵(Si-O-Si)連接在硅基質(zhì)上，形成帶有有機(jī)基團(tuán)的固定相Si-O-Si-R(R為CnH2n+1)，硅氧硅鍵可能在水溶液中水解而斷裂，使鍵合基團(tuán)脫落。